Tipizzazione genetica di linee cellulari umane (STR)

BMR Genomics offre il servizio di autenticazione cellulare Cell Profile effettuato con kit Promega PowerPlex Fusion System. Il servizio Cell Profile utilizza un metodo standard e internazionalmente riconosciuto in grado di:

• fornire l’impronta digitale della linea cellulare UMANA,
• rilevare cross-contaminazioni con altre linee

L’analisi di identificazione cellulare CELL PROFILE restituisce il profilo genetico unico della cellula che può essere comparato con un database o con il profilo genetico di una linea cellulare di riferimento.  

Non vengono rilevati:

• contaminazioni da specie non umane
• cross contaminazioni da cellule derivate dalla stessa linea parentale.  

BMR Genomics è provider ufficiale di Promega in Italia per il servizio Cell Authentication.

IL PROBLEMA

Dalla letteratura scientifica (vedi referenze sotto), è possibile stimare che il 15-20% delle linee cellulari in uso siano contaminate o erroneamente identificate; centinaia di pubblicazioni riportano esperimenti su linee contaminate da HeLa.

Errori di manipolazione e di etichettatura, errata classificazione, cross-contaminazioni, colture per tempi prolungati, sono cause note e rischi riconosciuti, insiti nel processo di allestimento e mantenimento di linee cellulari.

Le conseguenze sono perdita di tempo, spreco di soldi, dati non validi, esperimenti da rifare.

QUANDO NON RISCHIARE …

• in fase di allestimento di nuove linee cellulari
• prima di congelare le nuove linee cellulari
• prima di iniziare una nuova serie di esperimenti
• ogni due mesi in caso di crescita continua della linea
• per caratterizzare una nuova linea cellulare
• in presenza di risultati inattesi
• prima di pubblicare

Attenzione: sempre più riviste chiedono l’autenticazione della linea cellulare prima di accettare il lavoro!

PROTOCOLLO

Il servizio Cell Profile consiste di tre fasi:

1. amplificazione delle regioni STR* a partire da DNA genomico
2. elettroforesi su sequenziatore automatico
3. verifica dei risultati ed elaborazione del profilo

OpzionI disponibili:

• estrazione del DNA genomico da pellet cellulare;
• ricerca in DataBase del profilo ottenuto.

* Il sistema PowerPlex Fusion (Promega) consente la coamplificazione di 23 loci STR (D3S1358, D1S1656, D2S441, D10S1248, D13S317, Penta E, D16S539, D18S51, D2S1338, CSF1PO, Penta D, TH01, vWA, D21S11, D7S820, D5S818, TPOX, DYS391, D8S1179, D12S391, D19S433, FGA, D22S1045) e del locus Amelogenina per la determinazione del genere.